熒光顯微光學系統(tǒng)需要優(yōu)先考慮的是:
(1) 光學系統(tǒng)組成的材料應選用在激發(fā)光波內無熒光材料, 不但指光學系統(tǒng)玻璃也包括膠合制造中的膠合劑、切片、蓋玻片和浸液以及密封劑。若有自發(fā)熒光, 不但會增加背景光, 有時還會混淆觀察熒光圖像。
(2) 光學系統(tǒng)的參數選擇中, 應將獲得最大光能作為第一考慮因素。
照明系統(tǒng)中集光鏡應選用最大的包容角; 采用柯勒照明并使燈絲或弧光像充滿入瞳, 以期望獲得高效率的均勻照明。
收集熒光成像的物鏡, 因為像面照度與數值孔徑NA 2 成正式, 為此作為熒光用物鏡應有較大的NA值。目前10×已達015; 20×達0175; 40×達019; 油鏡40×達113。
雙目鏡筒作為熒光用時應在可見光譜段有較高的透過率, 采用鍍膜技術可大大地減少光能的損失, 它可比一般雙目鏡筒透射率提高一倍, 這對弱熒光物質觀察是必須的。
目鏡放大率不宜選大, 因為象面照度與目鏡放大率平方成反比。若其它條件相同, 當用613×目鏡時,照度定為100% , 換上1215×時, 照度約為25% , 因此常在4×~ 613×之間選用。
由此表明, 用不同物鏡和目鏡組合成同一倍率的顯微鏡時, 象面照度和曝光系數可相差數倍, 對于熒光觀察最佳組合是選用低倍率目鏡和NA 大的物鏡最為合適。
(3) 作為熒光光學系統(tǒng)各組成部件的光譜特性也是至關重要的, 特別是紫外光要通過的部件, 如照明系統(tǒng), 聚光鏡以及物鏡, 要關注紫光區(qū)的透射系數。聚光鏡要選用透紫外線的材料。照明系統(tǒng)中反光鏡表面鍍鋁比鍍銀好, 因為鋁在UV 和V 區(qū)反射率在90% 以上, 而銀僅達70%。加拿大膠吸收紫外線, 在紫外區(qū)通過處不宜用作膠合劑。